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        通过PCR的方法扩增目的基因片断的过程中,由于往往不清楚目的基因的DNA序列,获得的目的片断通常需要通过TA克隆的方法,重组到T-载体中,通过载体上通用引物测定DNA序列。TA克隆是目前克隆PCR产物最简便、快捷的方法。


美吉优势

1.快速、高质量的服务,一般4~7个工作日出结果。

2.T载体可选择PMD19T。


实验原理





1.请提供克隆片段的相关信息,包括名称、大小、样品是否带有“A”尾以及PCR产物是否已纯化。已纯化的PCR产物请确保使用的溶剂为灭菌的双蒸水。
2. PCR已纯化样品:浓度≥20ng/µl,体积≥20µl;PCR未纯化样品:浓度≥50ng/µl,体积≥25µl。所需DNA的总量会随片段大小的不同而有所变化。

3.请务必在订单上注明PCR所用引物序列,以便用于克隆结果的核对分析。
4.当克隆结果中包含客户提供的单向部分引物序列,我们即视实验成功,将收取全额的实验费用。
5.若序列中包含高GC、Poly等特殊或复杂结构导致测序中断,我们即视实验成功,将收取全额的实验费用。


(1) 为什么我挑出来的菌落是空载?

 答:①、您在PCR扩增的时候最后一步没有加A尾,导致没有连上载体;

 ②、您的扩增产物可能因为放置时间过长,有掉A尾的现象发生;

 ③、加的模板量过少,有些片段没有插入到载体里面。


(2) 你们涂平板大概多长时间?

答:我们涂平板一般都是过夜培养。


(3) 你们连接的时间大概是多少,温度是多少?

答:连接的温度是16℃,连接时间最少2个小时,片段越长,连接的时间就越长。


(4) 在我收到的结果里,为什么有时候会有XXXXX的东西?

答: 这些XXXX代表的是载体的序列,我们给您发送的结果是去过载体的序列,因此会有XXXX出现。


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